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增殖
多种刺激(如细胞因子治疗),可以影响细胞增殖。细胞增殖可以在多种刺激下发生,比如细胞因子暴露或各种其他进程。
细胞增殖染料
BD生物科学公司提供了BD Horizon™ 紫色增殖染料450(VPD)和BD Horizon™ CFSE,分别采用紫色激光和蓝色激光来检测细胞增殖,这便于使用更大的检测组套(panel)。这使得通过多色流式细胞仪从有限的样本中测定更多的数据,成为可能。
这两种增殖染料,都是非荧光酯化染料。酯基允许染料进入细胞。一旦染料进入细胞内,酯酶将把酯基裂解,将染料转化为荧光产物,并将其困在细胞内。随着每次复制事件的发生,细胞中的染料量减少,导致生成一种特征图。
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BD Horizon™细胞增殖染料自由进入一个细胞。一旦进入细胞,染料被非特异性酯酶裂解,释放出荧光分子,并且被困在细胞内。
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采用抗CD3e和抗CD28进行刺激的小鼠脾上VPD450浓度及细胞周期动力学。C57 Black/6脾细胞,要么加载不同浓度的BD Horizon™VPD450、DMSO,要么作为未处理的对照物,然后用抗CD3e和抗CD28刺激两天。在收集之前,细胞受到BrdU的脉冲作用,然后采用APC抗BrdU和7-AAD(Cat. No. 552598)进行染色。顶部检测组套(panel)(A-C)显示了APC 抗BrdU和7-AAD的染色。底部检测组套(panel)(D-F)显示了对应的VPD450直方图。对照细胞(Cells-)(检测组套A)和1-μM VPD450-加载细胞群(检测组套C)显示 BrdU+细胞的比例相似,(分别为40.7%和39.8%)。高浓度的染料,会对细胞增殖产生负面影响(数据未显示)。为了确认DMSO(用作VPD450的溶剂)不会导致增殖减少,我们添加了DMSO组(检测组套B)。经DMSO处理的细胞,掺入了BrdU,掺入的比例,与Cell-组和1-μM VPD450-加载细胞群的BrdU比例相似。
采用BrdU测定细胞增殖
BD生物科学公司提供了一系列抗体和试剂盒,用于通过测定溴脱氧尿苷(BrdU)来检测增殖细胞,而BrdU是一种DNA前体胸腺嘧啶的类似物,用于检测新生的DNA合成。
在细胞周期的S阶段(DNA合成),BrdU被掺入到新合成的DNA中,从而可以很容易被抗BrdU特异性抗体检测到。设计用于BrdU检测的BD抗体和试剂盒,在细胞内流式细胞术和免疫组织化学染色法中均可以使用,并且包括BD Horizon™ V450、BD Horizon Brilliant Violet™ 510(BV510)、 PerCP-Cy5.5等格式。
除了DNA增加之外,某些蛋白质的水平也会随着细胞增殖而上升。例如,Ki67是一种在分裂细胞细胞核中表达的抗原。然而,在细胞周期的G0阶段,没有检测到它。Ki67可以与其他增殖标志物(如BrdU和VPD450)结合使用,以增加可信度。这些标记物还可以与细胞表面和其他类型的标记物结合,以获得关于细胞亚群及其信号传导途径方面的额外信息。
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小鼠脾细胞的细胞增殖分析
将1µM VPD450加载于CD4+富集的小鼠脾细胞10分钟。然后用抗CD3/CD28刺激细胞,并且在指定时间收集细胞。在收获前约4 - 6小时,在BD GolgiStop™蛋白转运抑制剂存在的情况下,使用PMA/离子霉素刺激细胞。对细胞进行固定和破膜,然后采用IL-2染色,并且在BD® LSR II流式细胞仪上进行分析。
仅供研究使用,不用于诊疗程序。
Cy是全球生命科学解决方案德国股份有限公司的商标,或者以Cytiva名义开展业务的附属公司。
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