细胞周期阶段 | 研究免疫组织化学

在真核细胞中，细胞的生长、复制和分裂，是按照高度控制系列事件（被称为细胞周期）而发生的。在适应性免疫中，特异性T和B淋巴细胞在外源抗原刺激下，进行克隆性扩增（分裂、增殖和分化）。可以使用流式细胞术、免疫荧光检测法或免疫组织化学染色法，轻松地确定细胞周期状态。

细胞周期和细胞增殖的概述

为了帮助研究人员更好地了解涉及免疫、炎症、造血作用、肿瘤形成和其他生物应答的基本细胞机制，BD生物科学公司提供了一系列工具（包括抗体、试剂盒和系统），以检测增殖应答。

采用流式细胞术、免疫荧光检测法或免疫组织化学染色法，研究人员可以快速且准确地确定增殖群体中单个细胞的细胞周期状态或组织定位。这些工具包括：

分析细胞DNA含量所用的BD生物科学公司的试剂以及BD Cycletest™ Plus试剂盒
DNA染料包括碘化丙啶（PI）、 7-氨基放线菌素D（7-AAD）、 4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI）等。
细胞周期蛋白、视网膜母细胞瘤和磷酸化组蛋白H3的抗体

在适应性免疫中，特异性T和B淋巴细胞在外源抗原刺激下，进行克隆性扩增（分裂、增殖和分化）。在真核细胞中，细胞的生长、复制和分裂，是按照高度控制系列事件（被称为细胞周期）而发生的。

细胞周期

细胞周期有两个主要阶段：一个是分裂间期，指的是有丝分裂事件之间的阶段，另一个是有丝分裂阶段，在该阶段，母细胞分裂成两个遗传上相同的子细胞。分裂间期有三个明显的、连续的阶段。在被称为G1的第一个阶段，细胞监测它们的环境，并且当接收到必要的信号时，细胞合成RNA和蛋白质来诱导生长。当条件适宜时，细胞进入细胞周期的S阶段，并且致力于DNA合成和复制它们的染色体DNA。最后，在G2期，细胞继续生长，并且为有丝分裂做准备。

细胞DNA含量的分析

BD生物科学公司为细胞周期的研究，提供各种各样的试剂。试剂包括碘化丙啶（PI）、7-氨基放线菌素D（7-AAD）等核酸染料。此外，BD Cycletest™Plus试剂盒还包括PI和其他试剂，可以降解蛋白质和RNA（核糖核酸），从而实现更精确的DNA检测。随后，使用流式细胞仪对样本进行分析，以评估倍性，鉴定异常的DNA干系，并且估计DNA指数（DI）和干系的细胞周期阶段分布。在细胞周期的各个阶段，DNA水平发生改变，便于使用DNA染料（如7-AAD）以产生特征性的细胞DNA含量变化图（见下图）。

当细胞经历细胞周期的各个阶段时，诸如组蛋白H3 Ser28这样的蛋白，在表达上发生了修饰或改变。为了促进DNA复制，组蛋白被修饰，从而打开染色质，允许复制机制进入。为了进一步支持细胞周期的研究，BD生物科学公司为这些蛋白配备抗体，供成像或流式细胞仪的应用。

Data chart showing PE-A counts in test results.

Data comparing BrdU FITC and APC results.

方法类型	试剂	机制	技术	样本类型
DNA	细胞不透水染料：碘化丙啶（PI）、7-氨基放线霉素D（7-AAD）、DAPI（苯基吲哚）、DRAQ7™、BD Via-Probe™绿色核酸染色、BD Via-Probe™红色核酸染色细胞破膜染料：Hoechst （赫斯特）33342、 Hoechst 34580、 DRAQ5™	插入到核酸链中	流式细胞仪	细胞不透水染料：在完整的细胞中固定、破膜以及活/死鉴定细胞破膜染料：完整的细胞（未固定和未破膜）
新合成的DNA	BrdU、BrdU试剂盒以及BrdU抗体 EdU检测试剂盒	溴脱氧尿苷（BrdU）或乙炔脱氧尿苷（EdU）取代胸腺嘧啶（T）进行DNA分裂。然后用BrdU抗体或者EdU检测试剂进行检测。	流式细胞术（BrdU和EdU）、细胞成像术（BrdU和EdU），免疫组织化学染色法（仅BrdU）	固定和破膜的细胞，处理过的组织（仅限细胞成像检测仪、免疫组织化学染色法）
蛋白质水平	Ki67抗体，PCNA（增殖细胞核抗原）	水平上升，是增殖的结果。	流式细胞术、生物成像术、免疫组织化学染色法、蛋白质印迹法	固定的细胞、组织和提取物
蛋白质水平	细胞周期蛋白抗体、视网膜母细胞瘤（Rb）、其他细胞周期标记物	在细胞周期的不同阶段，水平会有上升和下降。	流式细胞术、生物成像术、免疫组织化学染色法、蛋白质印迹法	固定的细胞、组织和提取物
蛋白质修饰	磷酸化组蛋白H3的抗体，细胞周期蛋白依赖性激酶（cdk）	由于细胞增殖或细胞周期的变化，蛋白质被磷酸化了。	流式细胞术、生物成像术、免疫组织化学染色法、蛋白质印迹法	固定的细胞、组织和提取物
细胞因子	BD^® CBA （用于定量检测）	细胞因子的产生，可能随着细胞开始增殖而增加	流式细胞仪	组织培养上清液、EDTA血浆和血清样本